問(wèn): 中性封片劑（DPX)和水溶性封片劑有何區(qū)別？免疫熒光和普通免疫組化用的一樣嗎？
答: 中性封片劑DPX一般為PH 7.0左右的油性物質(zhì)，如中性樹(shù)酯，用二甲苯調(diào)成合適濃度后用于封片，但標(biāo)本要經(jīng)過(guò)脫脂、脫水等處理，可用于長(zhǎng)期保存切片等。水溶性一般為50%左右的甘油，用于短期保存染色的切片，如熒光染色。一般說(shuō)來(lái)，熒光染色和一般免疫組化的封片劑無(wú)區(qū)別，但由于熒光在堿性環(huán)境中能激發(fā)更綠的光，所以，用于封熒光染色的溶劑可調(diào)PH在8-10 之間。
答: 對(duì)不同顯色底物所用的封片劑也有所不同：
如辣根過(guò)氧化物酶HRP的作用底物為DAB或AEC.在DAB顯色后再用蘇木素或甲級(jí)綠甲基藍(lán)復(fù)染之后，以中性封片劑封片；而AEC顯色后用蘇木素或甲基藍(lán)復(fù)染，然后是以水性封片劑封片。
堿性磷酸酶AP的顯色底物包括BOIB/NBT或FAST-RED等。NBT顯色后復(fù)染與DAB同，也用DPX封片，而FAST-RED顯色則與AEC相同，也是用水性封片劑封片。
問(wèn)：DPX用量？是否等二甲苯未揮發(fā)干就封片？樹(shù)膠是否常溫保存？蓋玻片封片前為何要加熱？
答：
1 DPX為中性封固劑，用于多種染色方法勻不易褪色，但組織收縮較明顯，故應(yīng)盡量使其為均勻的一薄層。
2不干就封是對(duì)的，干封主要是有人怕聞二甲苯，從100%乙醇中出來(lái)不過(guò)二甲苯，干燥后再封。形態(tài)不好。
3樹(shù)膠不用在冰箱保存。
4蓋玻片封片前加熱可防止白霧的產(chǎn)生。
問(wèn)：在塑料培養(yǎng)瓶上作原位免疫組化，但是用丙酮固定后出現(xiàn)相似相溶，請(qǐng)問(wèn)用什么方法固定細(xì)胞，而避免相似相溶？
答：塑料培養(yǎng)瓶上作原位免疫組化有幾個(gè)問(wèn)題：
1.固定，丙酮不行，可用酒精或甲醇，會(huì)好一些；
2.封片，不能用DPX等脂溶性封片劑（也會(huì)溶），只有用甘油等水溶性封片劑；
3.攝像，塑料培養(yǎng)瓶上作原位免疫組化拍攝出來(lái)的照片質(zhì)量不太好，因?yàn)樗芰媳旧硗腹舛炔缓?，再加上固定時(shí)又會(huì)降低塑料透光度。
推薦：使用細(xì)胞培養(yǎng)片，如96孔板細(xì)胞培養(yǎng)片等，解決以上問(wèn)題。且方便操作。
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