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細胞大小測定及細胞計數(shù)注意事項
瀏覽次數(shù):7042 發(fā)布日期:2015-05-22

一、細胞大小測定也稱顯微測微實驗, 主要是利用目鏡測微尺和鏡臺測微尺配合使用對細胞大小進行測定。

A:鏡臺測微尺:是一種特制的載玻片,中央有一個全長1 mm 的刻度標尺,將1 mm 等分成100 個小格,每格長度為10 μm,用它來校正標定目鏡測微尺每小格的長度。?

B:目鏡測微尺:是一塊可放在目鏡內(nèi)的圓形薄片,中央有刻度,并被分為50 小格,每小格的長度隨物鏡放大倍數(shù)的大小而變動。測量細胞大小之前,預先用鏡臺測微尺來標定某一物鏡放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小格所代表的實際長度,再以它作為測量細胞的尺度。?

二、細胞計數(shù)實驗利用血球計數(shù)板進行操作,其構(gòu)造和計數(shù)原理是整個實驗的關(guān)鍵。

血球計數(shù)板:

由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成,玻片中有4 條下凹的槽,構(gòu)成3 個平臺。中間的平臺較寬,其中間又被一短橫槽隔為兩半,每半邊上面刻有一個方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9 個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數(shù)室,供計數(shù)用。這一大方格的長和寬各為1 mm,深度為0.1 mm,其體積為0.1 mm3。經(jīng)過恰當稀釋的細胞懸液,加到血球計數(shù)板的計數(shù)室中,在顯微鏡下逐格計數(shù),由于計數(shù)室的容積是固定的,故可將在顯微鏡下計得的菌體細胞數(shù)換算成單位體積的細胞數(shù)量, 經(jīng)過此方法可測得樣品中細胞總和。

三、實驗注意事項:

1)利用小方格邊長50 μm 進行標定目鏡測微尺時,易產(chǎn)生2 種不同的結(jié)果。有些人目鏡測微尺兩端重疊時用的是靠近中方格的小方格,而計數(shù)室的特點就是中方格的邊緣線都為雙線, 靠近中方格的小方格的一邊也為雙線,導致結(jié)果不一致。所以要正確的利用單線小方格的邊長進行標定目鏡測微尺。?

2)充分利用血球計數(shù)板, 不僅利用其小方格邊長的固定值,同時也利用其充當載玻片,在計數(shù)室內(nèi)進行細胞計數(shù),在計數(shù)室內(nèi)外都可以進行細胞大小的測定。?

3)細胞大小測定時,觀察酵母細胞應選擇代表性的細胞, 不要選擇剛剛出芽脫落下來的幼齡酵母,也不要選擇有明顯吸水膨脹的老齡酵母,觀察時一般選擇5~10 個典型酵母細胞求平均值。?

4)細胞計數(shù)時應避免重復計數(shù), 減少誤差, 嚴格按照“ 計左不計右,計上不計下” 的原則, 遇到有出芽的酵母, 只有當芽體與母細胞一樣大時計為2 個。

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